条件性基因敲除鼠

产品简介

CRISPR/Cas9（Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats）最新出现的一种由RNA指导Cas核酸酶对靶向基因进行特定DNA修饰的技术。CRISPR是细菌和古细菌为应对病毒和质粒不断攻击而演化来的获得性免疫防御机制。在这一系统中，crRNA（CRISPR-derived RNA）通过碱基配对与tracrRNA（trans-activating RNA）结合形成双链RNA，此tracrRNA/crRNA二元复合体指导Cas9蛋白在crRNA引导序列靶定位点剪切双链DNA达到对基因组DNA进行修饰的目的。CRISPR/Cas9系统能够对小鼠和大鼠基因组特定基因位点进行精确编辑， 目前已经成功应用于大、小鼠基因KO/KI的模型制备。

技术特点：

（1）无物种限制

（2）靶向精确性更高

（3）可实现对靶基因多个位点同时敲除

（4）基因调控方式多种多样

（5）修饰效率高，实验周期短

条件性基因敲除通常利用“Cre-LoxP”系统实现。首先把两个LoxP位点插入到目的基因的一个或几个重要外显子的两端，以制备出有两个Loxp位点的floxed小鼠。floxed小鼠在与表达Cre重组酶小鼠杂交之前，该基因正常表达；当floxed小鼠与组织特异性表达Cre酶的小鼠进行杂交后，可实现在特定的组织或细胞中敲除该基因，而在其它组织或细胞中该基因表达正常。

建系原则与流程：

1、与野生型小鼠杂交：阳性CRISPR-Pro小鼠（+/flox）与野生型小鼠（+/+）杂交，获得F1代杂合子小鼠（+/flox）；

2、挑选一对F1代杂合子小鼠（+/flox）进行自交，获得F2代纯合子小鼠（flox/flox）。

报告基因（Reporter/Tag）小鼠模型

指在目的基因的位置引入报告基因（如EGFP、mRFP、mCherry、mYFP或LacZ等）或标记基因的小鼠模型，通过报告基因的表达监控目的基因启动子的转录活性、监控目的蛋白的表达定位及细胞转运。

人源化（Humanized）小鼠模型

指带有功能性的人类基因、细胞、组织或器官的小鼠模型，通常被用做人类疾病体内研究的活体替代模型。本服务内容涉及到的是指带有功能性人类基因的小鼠模型。

Rosa26位点基因敲入小鼠模型

指在Rosa26位点引入某种基因的转基因小鼠模型。传统的转基因小鼠一般通过利用质粒进行受精卵原核注射的方式来制备，通常会得到多个品系（Founders)。不同品系由于质粒在染色体上的整合位点不同、拷贝数不同，不同品系之间不容易得到一致的结果。而且由于转基因小鼠传代后，转基因的拷贝数稀释以及基因沉默等原因，同一品系的表型在传代过程中也很容易丢失，造成实验结果不能重复。现在大部分实验室都是通过定点转基因的方式来制备转基因小鼠。其中用的最多的位点是Rosa26位点。

条件性点突变小鼠模型-诱导性（Inducible）

指在诱导剂的作用下，点突变能在特定的时间点被引入特定细胞或组织中目的基因位置的动物模型。诱导前表达野生型蛋白；诱导后，突变的蛋白在全身所有特定的细胞或组织中表达。

BioGene Cas9 Inc.

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E-mail: bgcas9@163.com

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