CRISPR /Cas9目的基因敲入细胞系

 产品介绍

       CRISPR/Cas9系统是原核生物的一种获得性免疫系统，是细菌抵抗病毒和外源质粒入侵的一种防御机制，将其应用在基因编辑领域，可对靶向基因进行特定DNA修饰。CRISPR是成簇规律性间隔短回文重复序列(Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats）的缩写，Cas是CRISPR相关基因（CRISPR-associated gene)的缩写，目前已发现Cas1—Cas13等多种类型的Cas基因，其中最成熟且应用最广的基因编辑系统是CRISPR/Cas9系统。

       CRISPER/Cas9系统由Cas9蛋白和向导RNA（sgRNA）组成，其中Cas9蛋白有两个核酸内切酶活性中心，向导RNA由成熟的crRNA通过碱基互补配对与tracrRNA形成特殊的双链RNA结构，然后与Cas9蛋白结合形成复合物，复合物定位并与基因组中的PAM共同序列结合，继而通过Cas9的两个内切酶活性中心对目标DNA的双链进行切割造成靶位点DNA双链断裂，随之利用细胞的非同源末端连接（NHEJ）或同源重组（HDR）的方式对切割位点进行修复，实现DNA水平的敲除、敲入或点突变。

通过设计合适的sgRNA序列，CRISPR/Cas9系统可在待插入位点附近打断DNA双链，当同源DNA模板（含待插入的序列）存在时，细胞的DNA修复系统会进行同源模板介导的修复（Homology directed repair，HDR），借此完成基因外源片段的插入。外源基因片段插入使用质粒作为模板，且两侧同源臂均需＞500bp。

服务优势：

1、精准高效   高效的CRISPR/Cas9系统，有效敲除目的基因，无物种限制，靶向精确性更高，有效降低脱靶对敲除效果的影响；

2、交付快速    优惠的服务价格，较短的实验周期；

3、团队专业    我司Cas9基因编辑团队目前已完成60余例细胞基因敲除案例，具备丰富的经验；

4、种子优良    所有细胞种子均从中科院细胞库购买，代数低无污染；

5、敲除无损    所有的敲除单克隆均通过多代次测序验证，确保敲除性状稳定不回复；

6、质控严格    建系后连续3代细胞增殖活力评估。

操作步骤：

1、Cas9基因目标靶点的确定；

2、sgRNA的设计合成，Cas9载体构建及敲除效率测试；

3、病毒包装与转染；

4、稳转细胞系筛选；

5、单克隆筛选；

6、纯合子鉴定；

6、实验报告整理、细胞冻存。

交付内容：

1、经测序验证的目的基因敲入细胞株及对照细胞株各2支，每支细胞量不少于1*106 Cells。

2、详尽的实验报告：包括细胞株培养信息、实验步骤；sgRNA序列及测序峰图；单克隆筛选测序验证报告。

服务流程：

BioGene Cas9 Inc.

Add: Block D，Erlang High-Tech pioneering zone，Jiulongpo District，Chongqing，P.R.China.  404000

Website: www.bg-cas9.com    

E-mail: bgcas9@163.com

Tel: 400-657-0168, 86-023-65316016/65316556  

Fax: 86-023-65316556