CRISPR /Cas9目的基因敲入细胞系
产品介绍
CRISPR/Cas9系统是原核生物的一种获得性免疫系统,是细菌抵抗病毒和外源质粒入侵的一种防御机制,将其应用在基因编辑领域,可对靶向基因进行特定DNA修饰。CRISPR是成簇规律性间隔短回文重复序列(Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats)的缩写,Cas是CRISPR相关基因(CRISPR-associated gene)的缩写,目前已发现Cas1—Cas13等多种类型的Cas基因,其中最成熟且应用最广的基因编辑系统是CRISPR/Cas9系统。
CRISPER/Cas9系统由Cas9蛋白和向导RNA(sgRNA)组成,其中Cas9蛋白有两个核酸内切酶活性中心,向导RNA由成熟的crRNA通过碱基互补配对与tracrRNA形成特殊的双链RNA结构,然后与Cas9蛋白结合形成复合物,复合物定位并与基因组中的PAM共同序列结合,继而通过Cas9的两个内切酶活性中心对目标DNA的双链进行切割造成靶位点DNA双链断裂,随之利用细胞的非同源末端连接(NHEJ)或同源重组(HDR)的方式对切割位点进行修复,实现DNA水平的敲除、敲入或点突变。
通过设计合适的sgRNA序列,CRISPR/Cas9系统可在待插入位点附近打断DNA双链,当同源DNA模板(含待插入的序列)存在时,细胞的DNA修复系统会进行同源模板介导的修复(Homology directed repair,HDR),借此完成基因外源片段的插入。外源基因片段插入使用质粒作为模板,且两侧同源臂均需>500bp。
服务优势:
1、精准高效 高效的CRISPR/Cas9系统,有效敲除目的基因,无物种限制,靶向精确性更高,有效降低脱靶对敲除效果的影响;
2、交付快速 优惠的服务价格,较短的实验周期;
3、团队专业 我司Cas9基因编辑团队目前已完成60余例细胞基因敲除案例,具备丰富的经验;
4、种子优良 所有细胞种子均从中科院细胞库购买,代数低无污染;
5、敲除无损 所有的敲除单克隆均通过多代次测序验证,确保敲除性状稳定不回复;
6、质控严格 建系后连续3代细胞增殖活力评估。
操作步骤:
1、Cas9基因目标靶点的确定;
2、sgRNA的设计合成,Cas9载体构建及敲除效率测试;
3、病毒包装与转染;
4、稳转细胞系筛选;
5、单克隆筛选;
6、纯合子鉴定;
6、实验报告整理、细胞冻存。
交付内容:
1、经测序验证的目的基因敲入细胞株及对照细胞株各2支,每支细胞量不少于1*106 Cells。
2、详尽的实验报告:包括细胞株培养信息、实验步骤;sgRNA序列及测序峰图;单克隆筛选测序验证报告。
服务流程:
BioGene Cas9 Inc.
Add: Block D,Erlang High-Tech pioneering zone,Jiulongpo District,Chongqing,P.R.China. 404000
Website: www.bg-cas9.com
E-mail: bgcas9@163.com
Tel: 400-657-0168, 86-023-65316016/65316556
Fax: 86-023-65316556