CRISPR /Cas9基因敲除细胞系
CRISPR/Cas9提高了基因编辑的准确性和特异性,使以前不可能开展的实验成为可能。它的效率是传统ZFN和TALEN系统的三到四倍。而且,只需导入几个不同的引导RNA,即可删除多个基因。该技术已广泛用于构建敲除细胞系,在这类细胞系中,靶标基因可以精确删除,从而完全去除其编码的蛋白质。根据不同细胞特点选择适宜的转染方法(病毒法,化学转染法或电转法)将gRNA序列和Cas9蛋白转入细胞中,并根据不同的转染方法进行不同时长的药筛。药筛完成后进行单克隆筛选,通过靶位点扩增及测序验证筛选出成功敲除的阳性克隆,最终交付纯合子细胞株与相关数据报告。
基因敲除细胞系服务内容:
基因情况:单基因或者多基因敲除
细胞类型:贴壁细胞、悬浮细胞
服务承诺:提供单克隆细胞株
服务周期:2-4个月
服务优势:
1、精准高效 高效的CRISPR/Cas9系统,有效敲除目的基因,无物种限制,靶向精确性更高,有效降低脱靶对敲除效果的影响;
2、交付快速 优惠的服务价格,较短的实验周期;
3、团队专业 我司Cas9基因编辑团队目前已完成60余例细胞基因敲除案例,具备丰富的经验;
4、种子优良 所有细胞种子均从中科院细胞库购买,代数低无污染;
5、敲除无损 所有的敲除单克隆均通过多代次测序验证,确保敲除性状稳定不回复;
6、质控严格 建系后连续3代细胞增殖活力评估。
基因敲除方案:
碧基Cas9(碧基生物)根据客户需求,结合靶基因的情况进行方案定制。通常情况下,对于每个基因,我们会设计3条sgRNA,靶向切割位置靠前的外显子区域,通过细胞自身的非同源修复机制,在切割位置产生碱基的突变、插入或部分DNA序列的删除,造成错义突变、无义突变、移码突变、片段缺失,进而影响下游RNA或蛋白的功能。
此外,碧基生物CRISPR/Cas9研发团队推出pWST-KOS系列质粒,可同时介导多个基因靶点的切割,实现基因的大片段删除,或同时删除多个基因!
操作步骤:
1、Cas9基因目标靶点的确定;
2、sgRNA的设计合成,Cas9载体构建及敲除效率测试;
3、病毒包装与转染;
4、稳转细胞系筛选;
5、单克隆筛选;
6、纯合子鉴定;
6、实验报告整理、细胞冻存。
交付内容:
1、经测序验证的目的基因敲除细胞株及对照细胞株各2支,每支细胞量不少于1*106 Cells。
2、详尽的实验报告:包括细胞株培养信息、实验步骤;sgRNA序列及测序峰图;单克隆筛选测序验证报告。
联系我们:
BioGene Cas9 Inc.
Add: Block D,Erlang High-Tech pioneering zone,Jiulongpo District,Chongqing,P.R.China. 404000
Website: www.bg-cas9.com
E-mail: bgcas9@163.com
Tel: 400-675-6758, 86-023-65316016/65316556
Fax: 86-023-65316556