超敏ECL化学发光试剂盒

产品名称：超敏ECL化学发光试剂盒

货号：BG892219

批号：240724K09

相关类别：试剂盒

目录价格：1396元（含税报价）

规格：250ml+250ml

1.收集蛋白样品(Protein sample preparation)

根据实验需要，使用适当的裂解液，收集完蛋白样品后，为确保每个蛋白样品的上样量一致，需要测定每个蛋白样品的蛋白浓度。根据所使用的裂解液的不同，需要采用适当的蛋白浓度测定方法。

2.电泳(Electrophoresis)
(1)  SDS-PAGE凝胶配制

SDS-PAGE凝胶可以参考一些文献资料进行配制。

(2)  样品处理

在收集的蛋白样品中加入适量浓缩的SDS-PAGE蛋白上样缓冲液。100℃或沸水浴加热3-5分钟，以充分变性蛋白。

(3)  上样与电泳

蛋白样品冷却到室温后，直接上样到SDS-PAGE胶加样孔内即可。

3. 转膜(Transfer)

我们推荐在Western实验中选用PVDF，其中最优先推荐使用PVDF膜(进口分装，6.6×212.5px,0.2μm)，在转膜过程中，特别是高电流快速转膜时，通常会有非常严重的发热现象，最好把转膜槽放置在冰浴中进行转膜。

4.封闭(Blocking)

转膜完毕后，立即把蛋白膜放置到预先加入Western洗涤液的Western洗膜盒中，漂洗1-2分钟，以洗去膜上的转膜液。从转膜完毕后所有的步骤，一定要注意膜的保湿，避免膜的干燥，否则极易产生较高的背景。

5.一抗孵育(Primary antibody incubation)

参考一抗的说明书，按照适当比例用Western一抗稀释液(P0256)稀释一抗。

6. 二抗孵育(Secondary antibody incubation)

参考二抗的说明书，按照适当比例用Western二抗稀释液稀释辣根过氧化物酶(HRP)或碱性磷酸酶(AP)等标记的二抗。

7. 蛋白检测(Detection of proteins)

洗片时可以使用X光片自动洗片机。