HT-29（人结直肠腺癌细胞）

基本信息：

培养基：McCoy’s 5a完全培养基

培养条件：培养温度37℃；气体环境5%CO2+95%空气

形态：上皮细胞样，多角形

生长特性：贴壁生长

细胞复苏
遵守快融的原则。先将水浴锅调至37℃，从液氮罐里拿出冻存管迅速投入37℃温水中，并轻轻摇动使其内容物迅速融化（最好在1 min以内），取出冻存管，微微上下晃动冻存管，用75%酒精消毒后开启，用吸管吸出溶解后的细胞悬液，注入离心管并加入5mL的含10%胎牛血清（FBS）的细胞培养液。以1000rpm离心5min，除去上清液，加入1 mL培养液吹打，使其形成悬浮液。用含20%FBS的细胞培养液适当稀释后，接种到培养瓶，置于37℃、饱和湿度、5%CO2孵箱中培养，24h后更换一次培养液，随后视细胞生长情况及培养液颜色（一般待培养液变黄）更换培养液，继续培养。

胞换液
首先将细胞收集到离心管，1000rpm离心5min，除去上清液，加入新培养液，轻轻吹打成细胞悬液，吸入培养瓶中继续培养或实验。

细胞传代
收集细胞至离心管，1000rpm离心5min，弃上清，加培养液，轻轻吹打成细胞悬液，按照1：2或1：3的比例传代至无菌培养瓶内，加入培养基后继续培养或实验。

细胞冻存
原则是慢冻：分别放置4℃/30 min，再转入-20℃/2 h后，再放入-80℃冰箱过夜，最后可放入液氮罐保存。或者直接使用程序降温冻存盒-80℃冰箱过夜，次日保存到液氮罐中。选择对数期生长的细胞，最好是已经传代培养2~3代后的细胞。
直接将细胞收集到离心管，1000rpm离心5min，弃上清，细胞冻存液重悬细胞至终浓度约107/mL，加入10%的DMSO。以每管1mL分装至冻存管中。按上述慢冻原则冻存细胞。

无菌操作注意事项：
细胞培养时一定要保持工作区的无菌清洁，先用紫外灯和臭氧杀菌1h，然后通风30min，操作前需要换细胞间专用拖鞋，双手带上一次性橡胶手套并用75%乙醇消毒，穿上实验服，戴上一次性口罩和帽子，整个无菌操作都应该在酒精灯的周围进行。